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熒光原位雜交(FISH)的原理是什么?
熒光原位雜交(FISH)是一種細胞遺傳學技術,可以用來對核酸進行檢測和定位。熒光標記的核酸探針只和具有高度相似性的核酸雜交,可用于染色體上基因的定位,或在分子生態學中用來標記不同分類細菌或古菌中的核糖體RNA。
FISH(fluorescence in situ hybridization)技術是一種重要的非放射性原位雜交技術。它的基本原理是:如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的,二者經變性-退火-復性,即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛,可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應,經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。
應用:
用于染色體數目檢查,還可用于部位精細改變的檢查。用來發現新生兒染色體異常疾病如21三體Down氏綜 合片)18三體(Edward綜合征),13體(Patau 綜合征),45、XO(turner氏綜合征)和47XXY(Klinfelter綜合征)。
白血病的診斷方面,該技術極易發現殘存的白血病細胞,特別適合化療后白血病患者。
實體腫瘤方面,應用較為廣泛的是乳腺癌臨床診斷,為單克隆抗體Herceptin的用藥給予指導,此外還適用于卵巢癌、子宮內膜癌、涎腺腫瘤及胃癌等惡性腫瘤。